再来显摆一哈

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送交者: 冰儿 于 2006-06-18 04:03:29

昨晚没时间回野狐和张生老师，抱歉。
先回野狐老师：偶和白字意见一致，老师这个实验作的的确很糟糕，你自己也说是在摸索阶段。白字秀才的问题还是很尖锐的，但是他没有看到问题的原因所在。偶下面大胆谈谈原因。

首先，FACS偶没有作过，但是基本原理懂。
白字秀才最主要的问题1是调亡细胞没有随辐射浓度变化，2是对照组的图里面没有单独的PS positive 细胞（这是不应该的很重要，不好用象限设置不准来解释，象限设置大概主要是依靠control 细胞位置作出的），3是右上和右下2个象限的细胞没有分开（没有形成cluster)。
这三个问题野狐老师在谈到该实验存在的具体问题时。都不能很好的解释，原因就不细谈了。藕认为能够解释这三个问题的原因很可能是狐老师在用胰蛋白酶分离贴壁细胞过程中使细胞膜进一步受到损伤所引起的。大家知道细胞凋亡时细胞膜上有一部分PS由内侧转到外侧，使FTCI显色，但有一种情况是没有细胞凋亡时FTCI也显色，那就只有是细胞膜的非凋亡损伤在前，使细胞核 的PI 和细胞内侧的PS同时显色。胰蛋白酶分离贴壁细胞后进行的FACS就是这种情况。
明白了这个现象就很容易想到：1）上皮细胞是贴壁生长（这在狐老师给出的普通光镜下图片可以确认）
2）荧光染色在胰蛋白酶分离下来以后进行（这应该是常规否则胰蛋白酶会解离荧光蛋白）时使原已经受紫外损伤凋亡的膜进一步损伤， 一方面使PI和细胞核结合，另一方面FTCI也进入细胞内使细胞膜内的PS显色，这就是一个假阳性结果了。
因此，狐老师的试验阳性结果是肯定的但里面参杂了很大一部分假阳性结果。偶的这种分析可以解释目前这个试验上面所有的3个问题。

再回张生老师， 请教“权威人士”结果是：吴戈老师第2张荧光图片的细胞是黑色素瘤细胞，不是BETA细胞， C-PEPTIDE也不是指胰岛素的C-PEPTIDE，而是一种人工合成的可以阻断integrin 的cyclic peptides与胰岛素无关。

偶的那些荧光分析内容都很好，没有错误。据老师讲，很多肿瘤细胞都有很发达的lysosome。偶认为那可能是巨噬细胞（或单核细胞）是情有可原的：）
权威人士推荐给藕一片文章，含有这个图片涉及的内容，还没有全文只有摘要，不过与偶所学的东东没啥关系，不感兴趣。




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